Какие изменения лабораторных маркеров вирусного гепатита C могут указывать на болезнь

Изменения лабораторных маркеров вирусного гепатита C указывают на необходимость дальнейшего обследования и уточнения диагноза. Важно обратиться к врачу для интерпретации результатов и определения следующих шагов в лечении.

Не стоит игнорировать эти изменения, поскольку они могут свидетельствовать о прогрессировании болезни или неправильной терапии. Своевременное получение профессиональной консультации поможет предотвратить развитие осложнений и улучшить качество жизни.

Статьи

По данным литературы, геном вируса гепатита С (ВГС) содержит информацию для синтеза трех структурных белков: ядерного протеина С (core), а также оболочных протеинов Е1 и Е2, и четырех неструктурных белков: NS2, NS3, NS4 (A,B) и NS5 (A,B). В ответ на эти белки в организме человека образуются антитела, которые можно обнаружить в кровотоке. В настоящее время существует широкий выбор современных диагностических тестов иммунологического и молекулярно-биологического характера, а также гистологических исследований печени для определения антительных и антигенных маркеров, а также RNA вируса гепатита С, которые различаются по чувствительности и специфичности [1, 2, 5, 8, 10]. Наиболее ранним признаком инфекции считается нахождение RNA-HCV в сыворотке крови через 1-3 недели после заражения. Однако положительный результат RNA-HCV в сыворотке обнаруживается только у 25% инфицированных ВГС при нормальных показателях активности трансаминаз, из-за чего заболевание часто остается недиагностированным в течение длительного времени [2].

Антитела к структурным белкам, как правило, можно обнаружить в сыворотке крови спустя 6-8 недель после инфицирования. Однако они не обладают достаточной способностью нейтрализовать вирус, чтобы полностью его устранить. Белки внешней оболочки (Е1 и Е2) вируса гепатита C имеют участки с высокой частотой замен аминокислот, что приводит к образованию множества генотипов и субтипов.

Антитела к неструктурным белкам появляются в сыворотке крови немного позднее, примерно через 10 недель от начала заболевания [3, 4, 5, 6]. Все больше исследований подтверждают предполагаемую роль и прогностическую ценность как антигенов, так и антител к вирусу гепатита C.

Считают, что нуклеокапсидный белок активирует апоптоз инфицированных клеток, способствует увеличению числа рецепторов апоптоза на клеточной мембране гепатоцита и повышению чувствительности клетки к проапоптотическим стимулам. Так, за чувствительность к интерферону возможно отвечает NS5 (A,B) белок.

Высокий уровень антител к поверхностным (структурным) белкам в остром периоде заболевания свидетельствует о благоприятном прогрессе HCV-инфекции [3]. Неприсутствие антител к NS5 белку у пациентов с ОГС характерно для фазы выздоровления [5]. Наличие анти-NS4 связано с более поздними морфологическими стадиями болезни, такими как цирроз печени [4, 7, 9].

Диагностическое значение антител к неконструктурному белку NS3 в литературе остается неоднозначным. Кроме этого, изучение маркеров вируса С проводилось в основном на образцах сыворотки крови пациентов с моноинфекцией HCV. Тем не менее, подтвержденная репликация ВГС не только в клетках печени, но и в эпителиальных клетках, кератиноцитах, лимфоидных клетках и даже в клетках крови стало основанием для изучения маркеров ВГС на эритроцитах крови пациентов [7, 11].

Таким образом, основной задачей нашей работы стало улучшение дифференциальной диагностики НСV-инфекции через анализ антител к структурным и неструктурным белкам ВГС как в сыворотке, так и на эритроцитах крови пациентов.

Материалы и методы

Изучение клинической картины, лабораторных показателей и антителогенеза проводилось у 57 больных, страдающих HCV-инфекцией и микст-инфекцией HCV + HBV. Первую группу пациентов получавших базисную терапию, составили 17 больных с острым гепатитом С (ОГС), вторую 15 с обострением хронического гепатита С (ХГС), третью 25 пациентов с микст-инфекцией HCV+HBV по типу супер-инфекции острый гепатит В на фоне хронического гепатита С (ОГВ+ХГС). Пациенты находились на стационарном лечении в Инфекционной клинической больнице №3 г. Москвы (главный врач – Лазуткина Л.И.).

Верификация вирусных гепатитов осуществлялась с применением иммуноферментного анализа (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Анализ спектра антител классов IgM и IgG к вирусу гепатита С в сыворотке крови и эритроцитах производился методом иммуноферментного анализа (ИФА) с использованием тест-систем «ИФА-АНТИ-HCV-СПЕКТР» и «ИФА-АНТИ-HCV-СПЕКТР-GM» компании НПО «Диагностические системы» (город Нижний Новгород). Исследование образцов крови пациентов проводилось в день их госпитализации и повторялось через месяц.

ИФА выполнялся строго согласно инструкции, прилагаемой к каждой тест-системе, с последовательным добавлением готовых реагентов в лунки планшета. Основой метода является реакция рекомбинантных антигенов, сорбированных отдельно на стрипах полистиролового планшета с антителами в исследуемых сыворотках и эритроцитах крови пациентов, инфицированных HCV.

Кровь из венозной системы была собрана из локтевой вены натощак и подвергнута центрифугированию в течение 5 минут при 1500 оборотов в минуту. Полученную сыворотку крови отделяли, помещали в пластиковые контейнеры и хранили в морозильной камере. Для проверки на вирусные гепатиты использовались методы иммуноферментного анализа (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Остатки осадка также помещали в морозильник. Перед началом реакции сыворотки крови пациентов размораживались, а осадок трижды центрифугировался с физиологическим раствором (0,9% NaCl) в течение 5 минут при 1500 оборотах в минуту для получения очищенных разрушенных эритроцитов.

Оценка результатов выполнялась спектрофотометрически при длине волны 450 нм. Определялась критическая оптическая плотность (ОП) каждого антигена по следующей формуле:

ОП крит. core-Ag = среднее значение ОП К- (core) + 0,2

В данном случае 0,2 представляет собой коэффициент, полученный в результате статистической обработки данных на предприятии-производителе, в то время как «К» обозначает контрольный образец сыворотки крови, не содержащий антитела к HCV, ВИЧ-1, 2, HbsAg и подвергшийся инактивации при температуре 56 градусов по Цельсию в течение трех часов.

Реакция считалась положительной, если результат превышал критический уровень, установленный на 20% и более.

Иммуноферментный анализ проводился в лаборатории кафедры инфекционных болезней, тропической медицины и эпидемиологии РГМУ, расположенной на базе клинической инфекционной больницы №3.

Результаты и обсуждение

В ходе анализа маркеров HCV-инфекции в сыворотке и на эритроцитах крови, а также при проведении динамического наблюдения за пациентами, были получены следующие выводы.

Все пациенты с моноинфекцией HCV при поступлении в стационар показывают наличие антител к ядерному белку ВГС (100%), тогда как у больных с смешанной инфекцией ОГВ+ХГС этот процент составляет 84%. В процессе течения заболевания выявляемость этих антител сохраняется на уровне 100% во всех категориях пациентов (табл. 1).

Таким образом, обнаружение антител к core-белку в сыворотке крови большинства пациентов при поступлении в стационар и после основного курса лечения может свидетельствовать о том, что у них имеется лишь HCV-инфекция, не указывая на длительность ее течения или стадию заболевания. Поэтому наблюдаемый спектр антител к структурному core-белку в крови пациентов окажется недостаточным для проведения дифференциальной диагностики HCV-инфекции.

Параллельное исследование спектра антител на эритроцитах крови продемонстрировало, что наибольшее количество антител к core-белку сохраняется у всех пациентов в острый период и в стадии реконвалесценции у больных с ХГС и смешанной инфекцией, по сравнению с ОГС (20%, р<0,02). Это дает возможность с большей вероятностью дифференцировать острое и хроническое течение HCV-инфекции при сопоставлении с сывороточным спектром антител к ядерному core белку (табл. 2).

Таким образом, обнаруженные изменения в антителогенезе к ядерному и неструктурному белкам NS3 при их совместном анализе в сыворотке и на эритроцитах крови могут более точно помочь врачу в дифференциальной диагностике и, возможно, в прогнозировании заболевания.

Достоверных различий при сравнении антител к NS4 белку в сыворотке крови в сравниваемых группах в период разгара не выявлено. В период ранней реконвалесценции отмечается тенденция к снижению частоты встречаемости антител к NS4 белку у больных с ОГС, без достоверных отличий. Увеличение процента встречаемости антител к NS4 белку отмечается у пациентов с ХГС и микст-инфекцией ОГВ+ХГС, причем при микст-инфекции это увеличение является достоверным по сравнению с показателем при поступлением (р<0,05).

Сравнивая частоту обнаружения антител к белку NS4 в сыворотке крови у пациентов с острым гепатитом С (ОГС) через месяц, наблюдается значительно меньший процент по сравнению с другими группами, что, вероятно, указывает на благоприятное течение HCV-инфекции (р<0,02). В то же время, на эритроцитах этих же пациентов (ОГС) в период острого течения и восстановления антитела не выявляются. Таким образом, соотношение уровня антител в сыворотке крови и на эритроцитах может предоставить полезную информацию о стадии заболевания.

Аналогичная ситуация наблюдается при анализе динамики антител к белку NS5. У больных ОГС наблюдается отсутствие этих антител на эритроцитах, независимо от стадии болезни. Это отсутствие как в сыворотке, так и на эритроцитах может служить возможным индикатором острого течения заболевания.

1. Полученные данные указывают на то, что сыворотка крови и эритроциты пациентов с HCV-инфекцией отличаются по набору антител, и этот набор зависит не только от продолжительности заболевания, но и от его стадии.

2. Полученные данные показывают необходимость одновременного определения антител как к структурным, так и неструктурным белкам ВГС как в сыворотке так и на эритроцитах крови пациентов.

3. Высокая чувствительность метода иммуноферментного анализа, позволяющая устанавливать наличие антител к эритроцитам в крови, в сочетании с его технической простотой, быстрой скоростью выполнения и низкой стоимостью, делает его применимым как в стационарных, так и в амбулаторных условиях.

1. Бурков А.Н., Блинова Т.В., Маянский А.Н., Лапшина Г.М. Вирусные гепатиты и их диагностика с использованием иммуноферментных систем. Методические рекомендации. Нижний Новгород 1998.-47с.

2. Воронкова Н.В. Хронический гепатит С с нормальными уровнями трансаминаз: клинические особенности, диагностика, подходы к лечению. Автореф. дис. к.м.н.-М.,-2002.-28с.

3. Ветров Т.А. Клиническое значение выявления антител к поверхностным белкам вируса гепатита С. Автореф. дис. к.м.н.-С-П.,-2003.-14с.

4. Гончарук М.Ю., Мазепа В.Н. и др. Тезисы доклада на НПК. // Новейшие технологии диагностики и лечения инфекционных заболеваний. — Санкт-Петербург, 1999. — С. 52-53

5. Дудина К.Р. Автореф. дис. к.м.н.-М.-2003.-23с.

6. Демиденко Т.П., Каменцева А.Н., Кузнецов Н.И. и др. Хронические вирусные гепатиты (причины, механизмы развития, методы лечения): Учебно-методическое пособие для врачей -Л., 2003.-35 с.

7. Жаров С.Н. Характеристики клинико-патогенетического течения и терапии парентеральных вирусных гепатитов. Автореферат диссертации д.м.н.-М.-2003.-45 с.

8. Жмуровская Л.С., Ключарева А.А., Казак В.Е. О диагностических методах вирусных гепатитов смешанной этиологии.// Медицинские новости.-2000.-№5.-с.64-65

9. Лучшев В.И., Жаров С.Н., и др. Динамика антител к структурным и неструктурным белкам у наркоманов с HCV-инфекцией.//Эпидемиология и инф. болезни.-2001.- №6.-с.30-32

10. Мукомолов С.Л. Хронический вирусный гепатит C. Клинические, эпидемиологические и лабораторные характеристики. Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук.- Санкт-Петербург.-1994.-35 с.

11. Lotz G., Szalay F., Firneisz G и др., Локализация РНК вируса гепатита C в человеках эритроцитах с использованием метода in situ PCR // Scand J Gastroenterol. -E., 2002 май 37(5)

Было проведено всестороннее клинико-лабораторное исследование пациентов, страдающих от HCV-инфекции и смешанной инфекции HCV+HBV, в рамках которого анализировались параметры специфического гуморального ответа. Выявлен различный характер спектра антител к структурным и неструктурным белкам вируса гепатита С (ВГС) в сыворотке и на эритроцитах крови пациентов, что варьировалось в зависимости от стадии заболевания (острая фаза и ранний этап выздоровления) и его течения (острый и хронический гепатит). Полученные результаты позволяют рекомендовать параллельное изучение спектра антител к белкам ВГС как в сыворотке, так и на эритроцитах крови пациентов для улучшения дифференциальной диагностики HCV-инфекции, объективизации прогноза и выбора лечебной стратегии.

Ключевые слова: вирусный гепатит С (ВГС), антитела и антигены ВГС, антителогенез ВГС в сыворотке и на эритроцитах крови, структурные и неструктурные белки ВГС

Краткое описание инфекции гепатита C

Гепатит C вызывается вирусом, содержащим РНК, который принадлежит к семейству Flaviviridae и роду Hepacivirus, и обладает высокой генетической изменчивостью. В настоящее время выделяют 6 основных генотипов и более 90 субтипов данного вируса. Изменчивость его генома приводит к вариациям в структуре антигенных детерминант, что влияет на образование специфических антител и затрудняет устранение вируса из организма, а также разработку эффективной вакцины.

Лабораторная диагностика гепатита С проводится иммунохимическими и молекулярно-биологическим методами исследования.

Люди, у которых обнаружены anti-HCV, должны пройти тестирование на наличие РНК ВГС или core Ag ВГС (при этом используется диагностический набор, который способен выявлять core Ag ВГС в концентрации, соответствующей 3000 МЕ/мл РНК ВГС и ниже).

Иммунохимическая (ИФА) диагностика вируса гепатита С выполняемая в лаборатории ООО НПЛ «СПЕКТР»

В лаборатории ООО НПЛ «СПЕКТР» проводятся исследования на вирус гепатита С с использованием иммунохимической диагностики (ИФА).

Индикатор

Примечание

В компании НПЛ «СПЕКТР» диагностика гепатита C осуществляется с использованием метода ИФА, а при получении положительного результата проводится дополнительное исследование для регистрации как структурных, так и неструктурных белков вируса гепатита C.

Определение структурных и неструктурных белков (HCV-core-Ag / HCV-NS-Ag)

Описание исследования

Гепатит C (HCV, ВГС) представляет собой вирусную инфекцию, затрагивающую печеночную ткань. В большинстве случаев это заболевание протекает бессимптомно — в остром периоде, длина которого сопровождается желтушностью кожи и слизистых, изменением цвета фекалий и мочи, проявляется лишь в 15% случаев.

Гепатит C чаще, чем другие формы, переходит в хроническую стадию, что без соответствующего лечения может привести к циррозу или первичному раку печени (гепатоцеллюлярной карциноме). Основные пути передачи вируса включают внедрение инфицированной крови и ее компонентов, пересадку зараженных органов и использование нестерильных игл во время пирсинга или татуирования.

Инфицирование может произойти во время проведения диагностических процедур, таких как гастроскопия, или лечебных манипуляций, например, санации ротовой полости. Редче вирус передается половым путем или во время внутриутробного развития. Это заболевание вызывается вирусом, содержащим РНК, из семейства Flaviviridae. Продолжительность инкубационного периода варьируется в зависимости от индивидуальных особенностей организма и может составлять от 2 до 26 недель.

Первичная диагностика ВГС заключается в проведении теста на выявление суммарных специфических иммуноглобулинов (IgM+IgG) к антигенам вируса гепатита С. В случае обнаружения антител или получения сомнительного результата первичного исследования проводится данный тест, позволяющий определить присутствие в крови антител к структурным (core) и неструктурным (NS3-5) белкам агента инфекции. Иммуногенность структурных и неструктурных белков HCV имеет разную степень активности.

Мониторинг динамики их появления и изменения титра позволяет сделать выводы о продолжительности заболевания и предсказать его течение. К примеру: антитела Anti-HCV core IgG (G-антитела к вирусным ядерным белкам) начинают синтезироваться примерно через 11-12 недель после инфицирования, достигая своего максимума к 5-6 месяцу болезни.

Этот уровень остается стабильным на протяжении всего заболевания, а В период реконвалесценции (восстановления нормальной функции организма после болезни). Для более раннего выявления инфекции исследуют наличие суммарных антител к core, которые появляются раньше других. В случае, если гепатит С переходит в хроническую стадию, антитела IgG будут циркулировать в крови на протяжении всей жизни.

Во время выздоровления уровень их титров постепенно уменьшается, пока через несколько лет не достигает неопределяемого значения. Anti-NS3-5. Наличие иммуноглобулинов NS3 характерно для начальных этапов сероконверсии (процесса выработки антител). В остром периоде болезни титр anti-NS3 существенно высок, что может служить отдельным показателем вирусной инфекции гепатита C.

Значительная концентрация этих антител свидетельствует о высокой вирусной нагрузке, а их длительная циркуляция в кровотоке – о возможном переходе болезни в хроническую форму. Появление anti -NS4 и anti-NS5 является показателем более позднего периода болезни. Высокие титры anti -NS4 при хроническом гепатите C могут говорить о длительности процесса.

Согласно некоторым источникам, уровень антител может свидетельствовать о степени повреждения печени. Повышенный титр anti-NS5 часто указывает на наличие РНК вируса. Обнаружение этих антител в острой фазе заболевания рассматривается как признак вероятного перехода болезни в хроническую форму.

Если во время динамического мониторинга выявлено снижение титров антител anti-NS4 и anti-NS5, это может указывать на приближение клинико-биохимической ремиссии. Снижение титров anti-NS5 может свидетельствовать о том, что лечение является эффективным, тогда как стабильный высокий уровень этих антител наблюдается у пациентов, которые не реагируют на терапию. После излечения обычно происходит постепенное уменьшение титров anti-NS4 и anti-NS5. Изучение антител к структурным и неструктурным белкам вируса гепатита C может также использоваться как подтверждающий тест при наличии положительных или неоднозначных результатов по суммарным антителам к HCV.

• перед забором крови следует избегать физических нагрузок;
• рекомендуется предотвращать стрессовые ситуации;
• в течение суток до обследования не следует употреблять алкоголь;
• в течение часа до взятия крови не курить;
• перед проведением тестирования ограничьте прием пищи;
• следует обсудить с врачом необходимость использования медикаментов, которые могут повлиять на результаты исследования, а Возможность их временной отмены;
• за 10-15 минут до взятия крови рекомендуется спокойно посидеть.

Не рекомендуется сдавать кровь после таких процедур, как инструментальные, ректальные, мануальные, ультразвуковые, рентгеновские исследования, кольпоскопия, гастроскопия, флюорография, биопсия, массаж, физиотерапия и других диагностических или лечебных мероприятий.

Показания к исследованию

• для анализа комплекса показателей, оценивающих степень хронизации инфекции;
• для дополнительной верификации положительных результатов или уточнения сомнительных данных, полученных в ходе первичных исследований;
• для диагностики лиц, относящихся к группе риска по гепатиту C (употребляющие наркотики, ВИЧ-позитивные, пациенты, получавшие переливания крови или ее компонентов, проходившие длительную терапию на аппарате «искусственная почка», дети, рожденные от матерей с вирусом ВГС, работники медицинской сферы и т.д.).

Тест имеет качественный характер. Результат определяется коэффициентом позитивности (КП), который вычисляется по формуле:

КП = оптическая плотность исследуемой пробы/предельное значение

Данный показатель отражает, насколько позитивен конкретный тест, что позволяет врачам более точно истолковывать полученные результаты. Универсальность коэффициента позитивности дает возможность применять его при проведении всех иммуноферментных исследований. Концентрация антител и коэффициент позитивности между собой никак не связаны, поэтому показатель не используется для наблюдения динамики развития заболевания, так же как и действенности проводимого лечения.

• негативный – КП < 1;
• позитивный – КП > 1.

Нормальное значение составляет КП < 1.

Позитивный результат может быть обнаружен:

• в случае заражения вирусом гепатита C;
• во время восстановления организма после болезни (реконвалесценция).

Негативный результат может указывать на:

• отсутствие вируса гепатита C;
• начальный этап заболевания (инкубационный период);
• серонегативную форму заболевания (т. е. протекающую без выработки специфических антител к инфекционному агенту).

В ряде случаев существует вероятность получения некорректных результатов, а именно:

• у младенцев, зараженных перинатальными инфекциями (т.е. полученными от матери во время беременности);
• у лиц, принимающих препараты, подавляющие иммунитет;
• в промежутке между инкубационным периодом и начальной стадией болезни (так называемое «диагностическое окно»), когда инфекционная нагрузка еще низка, что приводит к замедлению реакции иммунной системы.

Результат анализа предоставляется на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример оформления данного анализа приведен ниже:

Ф.И.О.: Петров Иван Иванович Пол: м Год рождения: хх.хх.хххх

Дата исследования: хх.хх.хххх

Исследование

Результат

Нормы интерпретации

Заметка

[262] Вирусный гепатит С — антитела к HCV core, NS3-5 Ig (M+G)

Дата оформления (дата анализа):

Исследования с использованием гибридизации in situ показали, что в сравнении со случаями гистологически подтвержденного ХГС в ткани печени пациентов со скрытой ВГС-инфекцией количество инфицированных гепатоцитов значительно ниже. Кроме этого, у таких пациентов показатели аланиновой аминотрансферазы, гамма-глобулинов и альфа-фетопротеина значительно ближе к норме. Тем не менее при скрытой ВГС-инфекции в ткани печени пациентов наблюдались выраженные признаки стеатоза [24].

Исследования показывают, что у людей со скрытой ВГС-инфекцией наблюдается более выраженная пролиферация CD 8+ Т-лимфоцитов и увеличение выработки гамма-интерферона в ответ на антигенную стимуляцию белками NS3 и NS4 ВГС по сравнению с пациентами, страдающими ХГС или гепатитом неясной этиологии.

На основании этого можно сделать вывод, что развитие скрытой ВГС-инфекции у этих пациентов может быть связано с изменениями в работе иммунной системы, которые проявляются в контроле над ГС.

Кроме того, важным вопросом для врачей является: необходимо ли и каким образом проводить лечение таких пациентов?

В 2006 году группа ученых под руководством М. Pardo провела шестимесячный лечебный курс с использованием пегилированного интерферона в комбинации с рибавирином на 10 пациентах, страдающих скрытой инфекцией ВГС, после чего проводилось последующее наблюдение в течение 24 недель. Хотя у 8 пациентов к окончанию противовирусной терапии в мононуклеарных клетках периферической крови не была выявлена РНК ВГС, стабильный результат (УВО) удалось сохранить только у 3 больных [25].

Скрытая инфекция ВГС на сегодняшний день считается хорошо изученным явлением, особенно в контексте службы переливания крови и трансплантации органов. Кроме того, углубленное исследование этой инфекции поможет лучше понять механизмы хронизации ВГС и разработать новые рекомендации по терапии для пациентов с хроническим гепатитом С.

Частые вопросы

Какие анализы необходимо сдать для выявления гепатита C?

Для выявления гепатита C необходимо сдать анализ на антитела к вирусу гепатита C (антитела к HCV) и анализ на вирусную нагрузку (количество вируса в крови).

Каковы основные методы лечения гепатита C?

Ключевые подходы к терапии гепатита C состоят в использовании прямых антивирусных средств (ПАП) и интерферонов. Выбор метода лечения основывается на генотипе вируса, уровне повреждений печени и других обстоятельствах.

Полезные советы

СОВЕТ №1

Посоветуйтесь с медицинским специалистом о том, какие анализы на гепатит C вам следует пройти и как часто их нужно делать в зависимости от уровня вашего риска заражения.

СОВЕТ №2

Имейте в виду, что тесты на вирус гепатита C доступны как в стандартных лабораториях, так и в специализированных учреждениях, что гарантирует высокую степень точности получаемых результатов.

СОВЕТ №3

После получения результатов анализов на гепатит C, обсудите их с врачом, чтобы получить рекомендации по дальнейшим шагам, включая необходимость лечения или мониторинга состояния.