Какой анализ ПЦР для выявления вируса гепатита более информативен: качественный или количественный

Качественный анализ ПЦР определяет наличие вируса гепатита в образце, то есть дает ответ на вопрос о том, есть ли инфекция или нет. Это тест поможет выявить вирус даже в малых количествах, однако не указывает, сколько вируса присутствует в организме.

Количественный анализ ПЦР, в свою очередь, не только подтверждает наличие вируса, но и измеряет его количество, что позволяет оценить активность инфекции и эффективность лечения. Таким образом, для точного понимания вирусной нагрузки и динамики заболевания предпочтительнее использовать количественный ПЦР-анализ.

Анализ ПЦР на гепатиты

В современной медицине выделяют пять типов вирусов, способных вызывать заболевания печени: это возбудители гепатитов A, B, C, D и E. Быстрая и точная идентификация типа вируса, его патогенности и потенциальной чувствительности к специфическим противовирусным препаратам является важнейшей задачей. В этой связи диагностика гепатитов с использованием метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) играет ключевую роль в установлении причины заболевания и выборе дальнейшей стратегии лечения.

1. РНК гепатита C («ПЦР качественный») – если этот элемент обнаруживается в анализе крови, это подтверждает наличие острого или хронического гепатита C. РНК можно выявить уже со второй недели после инфекции, что происходит раньше появления антител anti-HCV, что даёт возможность диагностировать заболевание на ранних стадиях. Определение РНК гепатита C методом ПЦР выполняется у пациентов с клиническими симптомами острого процесса и у тех, у кого результаты на гепатит оказались положительными.
2. Определение РНК гепатита С («ПЦР количественный») — вирусная нагрузка — является одним из ключевых индикаторов результативности противовирусной терапии и её анализа (по изменению уровня относительно первоначальных значений). Количественные показатели РНК гепатита С необходимы для оценки эффективности лечения и имеют прогностическое значение для выявления хронизации. Пациенты с низкой реакцией на лечение чаще имеют высокую вирусную нагрузку (значительное количество РНК) до начала терапии.
3. РНК гепатита С (генотипы 1, 2, 3) — выбор методов лечения и его эффективность зависят от типа вируса. Заболевание, обусловленное вирусом генотипа 1, имеет наихудший прогноз касательно результативности терапии. В соответствии с современными рекомендациями, анализ крови ПЦР на генотипирование гепатита С должен выполняться у пациентов перед началом противовирусной терапии.
4. РНК вируса гепатита С (расширенное генотипирование 1а, 1b, 2, 3а, 4, 5, 6) — в России распространены подтипы 1а, 1b, 2a, 2c, 2k и 3а. Гепатит С, вызываемый вирусами генотипов 1 и 4, имеет наиболее неблагоприятный прогноз.
5. Ультрачувствительная ПЦР на гепатит С (качественный метод) — этот анализ используется для ранней диагностики инфекции, идеально подходит для тестирования донорской крови и оценки эффективности противовирусной терапии. Рекомендуется проводить данное исследование даже в отсутствии антител к вирусу гепатита C у пациентов с заболеваниями печени неясной этиологии, а также у лиц с приобретенным иммунодефицитом или получающих иммуносупрессивное лечение.
6. Сверхчувствительный количественный ПЦР на гепатит С — инновационный тест с высоким уровнем чувствительности (10 МЕ/мл) для измерения уровня РНК вируса гепатита С в количественном формате. Данный анализ применяется для отслеживания эффективности лечения.

ПЦР на гепатит В

1. ДНК вируса гепатита В (качественный тест) — это показатель активности вируса гепатита В. Этот маркер устанавливается в крови первым, обычно спустя месяц после заражения. В некоторых случаях он может быть единственным индикатором латентной HBV-инфекции. Выявление ДНК вируса позволяет диагностировать гепатит B, вызванный мутировавшими штаммами, при этом не определяются другие маркеры инфекции.
2. ДНК вируса гепатита В (количественный тест) — это измерение уровня ДНК (вирусной нагрузки) — один из анализов, позволяющий определить стадию хронического гепатита В и оценить эффективность противовирусного лечения. Анализ проводится как до начала, так и во время терапии.
3. Генотипирование вируса гепатита B — данное заболевание может проявляться по-разному в зависимости от генотипа вируса. Например, гепатит В, вызванный вирусом генотипа C, часто переходит в хроническую форму и несет высокий риск развития цирроза печени или гепатоцеллюлярной карциномы. В свою очередь, пациенты, инфицированные генотипом A, обычно имеют лучшие показатели на фоне лечения.
4. Ультрачувствительный ДНК-ПЦР-метод для гепатита В (качественный тест) — используется для раннего обнаружения заболевания. Этот метод обладает высокой информативностью при анализе крови доноров и может служить для подтверждения естественного или медикаментозного исчезновения вируса из организма.
5. Ультрачувствительный ПЦР-метод на гепатит С (количественный тест) — позволяет диагностировать ДНК вируса гепатита В в количественном выражении. Анализ проводится с целью оценки эффективности проводимой терапии.
6. Выявление мутаций, вызывающих устойчивость к противовирусным средствам, таким как ламивудин, телбивудин, энтекавир, адефовир, тенофовир (сдаются одновременно с анализом «количественное определение ДНК гепатита В»). Анализ необходимо провести у пациентов с хроническим гепатитом В перед началом лечения противовирусными препаратами и в процессе их применения. Результаты данного теста ПЦР на гепатит Б предоставляют данные о резистентности вируса к противовирусным медикаментам:
7. R — вирус проявляет устойчивость к противовирусному средству (выявлены мутации устойчивости к данному препарату);
8. S — вирус гепатита В чувствителен к лекарству (нормальный показатель, мутации устойчивости не найдены);
9. I — у патогена может возникнуть устойчивость к данному препарату.

Вирус гепатита В (HBV), определение ДНК методом ПЦР в крови (количественное исследование — вирусная нагрузка)

Гепатит B (ВГВ, HВV) представляет собой острое инфекционное заболевание, вызванное ДНК-содержащим вирусом HBV. Это заболевание, в большей степени передающееся через заражённую кровь, проявляется в клинически выраженных случаях симптомами острого поражения печени и интоксикации, включая желтуху и её отсутствие. Протекание болезни может быть разнообразным, варьируя от полного выздоровления до развития хронического гепатита B, цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы. Вирус гепатита B, обладая ДНК, отличается высокой устойчивостью к воздействию ультрафиолетового излучения, перепадам температуры и различным детергентам.

Гепатит В является антропонозом. Источниками инфекции при гепатите B являются больные с различными формами данного заболевания. Вирус у инфицированных лиц содержится в крови, сперме, вагинальном секрете. Механизм инфицирования – гемоконтактный (парентеральный).

Способы передачи инфекции: естественные (половой, бытовой, перинатальный) и искусственные, связанные с парентеральными вмешательствами. К вирусному гепатиту В восприимчивы все, что обусловлено наличием специфических рецепторов к антигену HBs на клетках печени.

Основную угрозу в рамках парентеральных гепатитов представляют искусственные пути передачи вируса, возникающие в процессе выполнения немедицинских и медицинских процедур, которые могут приводить к повреждению кожных покровов или слизистых оболочек, а В случаях, когда существует риск их травматизации.

Заражение вирусами гепатитов, передающихся парентерально, может произойти в ходе немедицинских процедур, которые связаны с повреждением кожных или слизистых тканей. Это происходит при уколах наркотических веществ (особенно высокий риск составляет 80-100%), а Во время нанесения татуировок, пирсинга, проведения ритуалов, а В ходе косметических, маникюрных и педикюрных услуг с применением загрязненных инструментов.

Люди, находящиеся в группе повышенного риска, включают медицинских работников, пациентов, требующих гемодиализа или переливания крови, заключенных, членов семей HBs-позитивных людей и новорожденных от матерей, имеющих HBs-положительный статус.

В жизнедеятельности вируса гепатита В различают две фазы: фазу репликации и фазу интеграции.

Во время стадии репликации осуществляется размножение вируса. ДНК вируса проникает в ядро гепатоцита, где при помощи ДНК-полимеразы образуется нуклеокапсид, в котором содержится ДНК вируса и антигены HBcAg, HBeAg, представляющие собой главные цели для иммунной системы.

После этого нуклеокапсид перемещается из ядра в цитоплазму, где осуществляется репликация белков внешней оболочки (HBsAg), что приводит к сборке завершенного вириона. В процессе сборки избыточное количество HBsAg, не использованного для формирования вируса, через межклеточное пространство попадает в кровоток. Завершение сборки (репликации) вируса происходит с презентацией растворимого нуклеокапсидного антигена – HBeAg на мембране гепатоцита, где он «распознается» иммуноцитами. Антиген HBcAg присутствует в клетках печени, но не может быть обнаружен серологическими методами, так как не существует в свободном состоянии в крови. Вместо этого в крови выявляются антитела (anti-HBc) к данному антигену, которые образуются благодаря его высокой иммунной активности.

На этапе интеграции происходит внедрение (встраивание) фрагмента вируса гепатита В, содержащего ген HBsAg, в геном (ДНК) гепатоцита, что в итоге приводит к образованию в основном HBsAg. В этот момент репликация вируса приостанавливается, но генетическая система гепатоцита продолжает активно производить HBsAg.

Вирустная ДНК может интегрироваться не только в гепатоциты, но В клетки поджелудочной железы, слюнных желез, лейкоциты, сперматозоиды и клетки почек. Этап интеграции сопровождается развитием клинико-морфологической ремиссии. На этом этапе зачастую возникает иммунологическая толерантность к вирусу, что способствует снижению активности заболевания и образованию носительства HBsAg. Интеграция делает вирус невосприимчивым к иммунному контролю.

Инкубационный период варьируется от 1-4 до 6 месяцев, в среднем составляет около 80 дней. Гепатит В проявляется циклически и может иметь разную степень выраженности: легкую, среднюю и тяжелую.

Преджелтушный этап продолжается от 8 до 12 дней и иногда дольше. Начало заболевания происходит постепенно. На этом этапе наблюдаются астеновегетативные (слабость, быстрая утомляемость, общая разбитость) и диспепсические (ухудшение аппетита, тошнота, иногда рвота, чувство горечи во рту, тяжесть и тупые боли в правом подреберье) синдромы. Также часто возникают головные боли и нарушения сна.

Около 20-30% пациентов испытывают дискомфорт в крупных суставах, возникают высыпания в виде уртикарии, а иногда и зуд кожи. В завершающей стадии преджелтушного периода наблюдается увеличение печени (порой и селезенки), появляются тёмная моча и ахоличный стул. Лабораторные исследования показывают наличие уробилиногена в моче, а иногда и желчных пигментов. В крови фиксируется повышенная активность АЛТ и АСТ, а также обнаруживаются ДНК вируса и специфические маркеры HBV-инфекции (HBsAg, HBeAg, анти-HBcIgM). Важно отметить, что преджелтушный период может отсутствовать, при этом темная моча и пожелтение склер становятся первыми признаками заболевания.

Период желтухи. С развитием желтухи состояние пациентов ухудшается: наблюдается нарастание слабости, снижение аппетита вплоть до анорексии, появление тошноты, сухость и горечь во рту, а также часто возникают головные боли и головокружения, артралгии исчезают. В это время печень ещё больше увеличивается в размерах. Желтуха постепенно усиливается, достигая своего пика на 2-3 неделе.

Моча становится тёмной, кал при максимальной желтухе принимает ахоличный характер. Продолжительность этого периода может колебаться от нескольких дней до нескольких недель, но чаще составляет 2-6 недель. Активность АЛТ может увеличиваться в 30-50 раз на протяжении всего желтушного периода. При тяжёлой форме болезни нарушается белково-синтетическая функция печени при ВГВ.

(снижение содержания альбумина, протромбинового индекса). В периферической крови обнаруживают тенденцию к лейкопении и лимфоцитозу, СОЭ снижается или в норме.

Существуют субклинические и скрытые формы (без наличия жалоб и клинических симптомов, но с обнаружением специфических маркеров гепатита В при повышенном или нормальном уровне АЛТ).

Подтверждение диагноза гепатита В основывается на выявлении характерных серологических маркеров и ДНК вируса. Рекомендуется выполнять определение ДНК вируса гепатита В с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) как в качественном, так и в количественном формате для пациентов с подозрением на острый вирусный гепатит В, что позволяет своевременно оценить уровень вирусной нагрузки.

Метод ПЦР дает возможность обнаружить ДНК вируса в сыворотке крови и лимфоцитах, что свидетельствует о его репликации. ДНК вируса гепатита B начинает обнаруживаться в крови в среднем через месяц после заражения и служит первым диагностическим маркером ВГВ, предшествуя появлению HBsAg на 10-20 дней. Анализ на ДНК ВГВ позволяет проводить раннюю диагностику острых форм гепатита B, выявлять скрытые (латентные) формы заболевания и штаммы вируса, мутирующие по HBeAg. Количественное определение ДНК ВГВ дает возможность оценить вирусологический ответ на лечение.

Положительный результат ПЦР, полученный через более чем полгода, свидетельствует о наличии хронической инфекции. Измерение вирусной нагрузки (количество вирусной ДНК в крови) позволяет оценить вероятность перехода заболевания в хроническую стадию. Увеличенные уровни печеночных трансаминаз при положительном ПЦР могут указывать на необходимость терапии. Во время терапии вирусного гепатита В исчезновение вирусной ДНК подтверждает эффективность лечения.

Показания для назначения:

• диагностика острого гепатита В;
• обнаружение стертых, инаппарантных форм гепатита В;
• диагностика гепатитов смешанной этиологии — определение основного вируса;
• оценка стадии активной репликации вируса при хроническом гепатите В;
• мониторинг эффективности проводимого лечения.

Справочные значения: не выявлено (отрицательный итог).

Рекомендуется не есть в течение 2-3 часов.

Отрицательный итог: ДНК вируса гепатита B не обнаружена или уровень ниже чувствительности используемого метода.

Вирус гепатита B, определение ДНК (HBV-DNA) кол. в сыворотке крови

Гепатит В (Virus Hepatitis B, HBV) представляет собой инфекционное заболевание, вызванное ДНК-содержащим вирусом из семейства Hepadnaviridae – вирусом гепатита В (ВГВ, HBV), который поражает печень и может протекать как в острой, так и в хронической формах.

Передача вируса осуществляется через кровь (при использовании зараженных игл, шприцев и других мединструментов, а Во время косметических процедур, татуировок и подобных манипуляций с многоразовым оборудованием, когда кожа или слизистые подвергаются повреждениям), половым путем и от инфицированной матери к ребенку (вертикальный путь), особенно в случае заражения женщины в третьем триместре беременности. Инкубационный период варьируется от 30 до 180 дней.

Количественная характеристика содержания ДНК вируса гепатита В важна для оценки эффективности противовирусной терапии и имеет прогностическое значение для определения вероятности хронизации болезни.

Для анализа уровней ДНК вируса гепатита B часто применяется выражение «уровень виремии»:

• низкая виремия – менее 2х10^5 копий/мл (4,44х10^4 МЕ/мл);
• средняя – от 2х10^5 копий/мл (4,44х10^4 МЕ/мл) до 2х10^6 копий/мл (4,44х10^5 МЕ/мл);
• высокая – более 2х10^6 копий/мл (4,44х10^5 МЕ/мл).

При изначально низком уровне виремии вероятность хронизации острого гепатита B практически равна нулю. При среднем уровне виремии хронизация наблюдается у 25-30% пациентов, тогда как при высоком уровне виремии острый гепатит B чаще всего переходит в хроническую стадию. Снижение уровня ДНК вируса гепатита B на 85% к третьему дню лечения является быстрым и надежным показателем для прогнозирования эффективности терапии.

Аналитические характеристики

Определяемый фрагмент – специфический участок ДНК вируса гепатита B.

Специфичность данного определения составляет 100%. Чувствительность определения равна 20 МЕ/мл. Линейный диапазон находится в пределах от 102 до 1×108 МЕ/мл.

С какой целью количественно определяют ДНК вируса гепатита B в сыворотке крови

Определение ДНК вируса гепатита В в сыворотке крови применяется в рамках комплексной диагностики, дополняя анализ маркеров и оценку клинических проявлений для прогнозирования результатов болезни и эффективности лечения.

1. Ивашкин В. Т. и другие. Рекомендации по клинической практике Российской гастроэнтерологической ассоциации и Российского общества по изучению печени касательно диагностики и терапии взрослых пациентов с гепатитом В // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. – 2014. – №. 3. – С. 58-88.
2. Клинические рекомендации Министерства здравоохранения Российской Федерации. Острый гепатит В (ГВ) у взрослых. – 2021.
3. Санитарные правила и нормы СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных заболеваний».
4. Туполева Т. А. Латентная форма инфекции, вызываемой вирусом гепатита B // Гематология и трансфузиология. – 2018. – Т. 63. – №. 2.
5. Forns X., Puoti M., Sarrazin C. рекомендации Европейской ассоциации по изучению заболеваний печени относительно терапии пациентов с гепатитом С (2015).
6. Документация от производителя реактивов.

Какой анализ показывает точнее вируса гепатита в пцр качественный или количественный

Анализ на обнаружение вируса гепатита B (HBV) включает использование метода полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (РТ-ПЦР) для определения наличия генетического материала (ДНК) вируса и его объема (вирусной нагрузки) в образце крови.

ДНК HBV может быть идентифицирована в концентрации, находящейся ниже минимально допустимого уровня линейного диапазона. Линейный диапазон представляет собой интервал, в котором возможно точное подсчитывание количества вирусных копий. Пределы определяемых концентраций колеблются от 100 до 10^8 МЕ РНК ВГВ.

Русские синонимы

Вирус гепатита B (ВГВ), количественное выявление ДНК.

Синонимы английские

ДНК вируса гепатита B, количественный, ПЦР в реальном времени, кровь; вирусная нагрузка HBV; количественный анализ ДНК вируса гепатита B.

Метод анализа

Полимеразная цепная реакция с реальным временем.

Единицы измерения

МЕ/мл (международные единицы на миллилитр).

Какой биологический материал подходит для анализа?

Как необходимо подготовиться к проведению исследования?

• Избегайте курения за 30 минут до анализа.

Общая информация об исследовании

Вирусный гепатит B (ВГВ) представляет собой инфекционное заболевание печени, вызываемое ДНК-содержащим вирусом гепатита B (HBV). Среди всех факторов, способствующих острому гепатиту и хронической вирусной инфекции, вирус гепатита B является одним из самых распространённых на планете.

Действительное количество инфицированных неизвестно, так как у многих людей инфекция протекает без специфических симптомов и за медицинской помощью они не обращаются. Нередко вирус обнаруживают при проведении профилактических лабораторных исследований. По приблизительным подсчетам, в мире около 350 миллионов человек поражено вирусом гепатита В и ежегодно от его последствий умирает 620 тысяч. В России количество носителей HBV превышает 5 миллионов человек.

Источником инфекции является больной гепатитом B или бессимптомный носитель вируса. Вирус гепатита B (HBV) передается через кровь и другие биологические жидкости. Заражение может произойти при незащищённых половых отношениях, использовании нестерильных шприцев, переливании крови и пересадке органов от донора. Ребёнок может получить вирус от матери во время или после родов, например, через трещины в сосках. К группе риска относятся: медицинские работники, которые могут контактировать с зараженной кровью, пациенты, проходящие гемодиализ, наркозависимые, люди, ведущие беспорядочные половые связи, а также дети, рожденные от матерей, инфицированных ВГВ.

Инкубационный период вирусного гепатита В варьируется от 4 недель до полугода. Это заболевание может проявляться как в легкой форме, которая длится несколько недель, так и в виде хронической инфекции, продолжающейся многие годы. Симптомы гепатита включают желтуху, повышенную температуру, тошноту, усталость, а в анализах крови — признаки нарушения функций печени и наличие специфических антигенов вируса. Острая форма заболевания может быстро привести к летальному исходу, перерасти в хроническую инфекцию или закончиться полным выздоровлением. Считается, что после перенесенного вирусного гепатита В образуется долговременный иммунитет. Хронический вирусный гепатит В может привести к циррозу печени и раку.

Существует несколько специализированных тестов для диагностики активного или перенесенного вирусного гепатита В. Для верификации наличия инфекции и уточнения стадии болезни проводят анализ на антигены вируса, антитела к ним и его ДНК.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Этот метод позволяет как качественно, так и количественно определить ДНК вируса. Качественный анализ подтверждает наличие вируса гепатита В в организме и его активное размножение, в то время как количественная оценка вирусной нагрузки помогает выявить степень прогрессирования заболевания, эффективность лечения и возможное развитие резистентности к противовирусным средствам.

Существует прямая связь между уровнем вирусной нагрузки в крови и результатом заболевания острым вирусным гепатитом В. При низком уровне виремии риск перехода болезни в хроническую стадию практически отсутствует, и инфицированный человек не представляет угрозы для других. При высокой вирусной нагрузке (< 10 5 копий/мл) хроническая форма инфекции встречается довольно часто, и пациент становится потенциальным источником вируса. Установлена взаимосвязь между количеством ДНК вируса в сыворотке крови, наличием HBeAg, повышенными показателями АЛТ и развитием цирроза печени, а также гепатоцеллюлярной карциномы (рака печени).

Эффективность терапии против вирусов определяется по снижению уровня ДНК вируса в кровяном русле. В течение 3-6 месяцев после начала терапии при адекватной реакции вирусная нагрузка должна уменьшиться на 1-2 порядка. Если наблюдается отсутствие снижения уровня вируса или его увеличение во время лечения, это требует пересмотра и коррекции схемы терапии.

Количественный анализ ДНК вируса гепатита В в сочетании с клиническими проявлениями, биохимическими показателями, маркерами инфекции и результатами пункционной биопсии печени позволяет сделать прогноз по заболеванию и оценить необходимость в проведении противовирусного лечения.

Для чего проводится данное исследование?

• Для оценки прогноза течения вирусного гепатита В.
• Для верификации хронической формы вирусного гепатита В.
• Для определения носителей вируса гепатита В и контроля за активностью его репликации.
• Для распознавания скрытых и мутировавших штаммов вируса гепатита В.
• Для оценки результата противовирусного лечения гепатита В и принятия решений относительно дальнейшей терапии.

Когда проводится исследование?

• При качественном выявлении ДНК вируса гепатита В.
• При остром и хроническом гепатите В вирусной природы.
• При смешанных гепатитах.
• До начала и в процессе противовирусной терапевтической процедуры.

Что означают результаты?

Результат: не выявлено.

Концентрация: от < 1.0*10^2 до >1.0*10^8 МЕ/мл.

• От 100 МЕ до 10^8 МЕ ДНК ВГВ – результат считается положительным с указанием зафиксированной концентрации ДНК ВГВ в образце (в МЕ/мл).
• Свыше 10^8 МЕ — результат рекомендуется трактовать как положительный с концентрацией ДНК ВГВ «больше 10^8 МЕ в отобранном материале».
• Менее 100 МЕ — результат следует интерпретировать как положительный с концентрацией ДНК ВГВ «меньше 100 МЕ в отобранном материале».

Диапазон определяемых концентраций – от 100 до 10^8 МЕ РНК ВГВ.

Важные замечания

• Количественный анализ ДНК вируса гепатита В является обязательным исследованием перед началом противовирусной терапии. В процессе лечения анализ следует повторять через 3-6 месяцев.
• Вирусный гепатит В часто встречается в комбинации с вирусным гепатитом D.

Также рекомендуются

• HBsAg
• anti-HBc, IgM
• anti-HBc, антитела
• anti-HBe, антитела
• anti-HBs, антитела
• HBеAg
• HBV, ДНК [реал-тайм ПЦР]
• anti-HDV, антитела
• Anti-HCV, антитела, ИФА
• Гамма-глютамилтранспептидаза (гамма-ГТ)
• Аланинаминотрансфераза (АЛТ)
• Аспартатаминотрансфераза (АСТ)
• Щелочная фосфатаза общая
• Альбумин в сыворотке
• Общий билирубин
• Общий холестерол
• Время тромбообразования
• Фибриноген

Кто проводит назначение исследования?

Источники

1. Возианова Ж.И. Инфекционные и паразитарные болезни: В 3-х томах – Киев: Здоровье, 2000 – Том 1.: 601–654.
2. Chan Henry Lik-Yuen, Wong May Ling и другие. Использование количественного анализа ДНК вируса гепатита B для предсказания реверсии антигена гепатита B в случаях хронического гепатита B. J Clin Microbiol. октябрь 2003; 41(10): 4793 – 4795. PMCID: PMC294957
3. Принципы внутренней медицины Гаррисона. 16-е издание. Нью-Йорк: McGraw-Hill; 2005: 1822-1855.
4. Управление гепатитом B. Конференция консенсуса NIH. Программа и аннотации. 20 – 22 октября 2008 года.

Разновидности ПЦР

Ключевые методические подходы и типы полимеразной реакции:

Тип полимеразной реакции

Описание метода

Вложенная полимеразная цепная реакция (ПЦР) является адаптацией классической ПЦР, разработанной с целью повышения чувствительности и специфичности. Данная методика предполагает использование двух наборов праймеров и выполнение двух последовательных реакций ПЦР. Вложенная ПЦР особенно полезна для амплификации генов, которые присутствуют в незначительных количествах.

Эта техника применяется в ситуациях, когда есть информация только о небольшой области внутри необходимой последовательности. Обычная полимеразная цепная реакция требует знания ДНК-последовательностей на обоих концах амплифицируемой зоны. В отличие от нее, инверсная ПЦР (IPCR) и фиксированная такая информация не являются обязательными. IPCR позволяет усиливать фланкирующие неизвестные ДНК-последовательности с помощью обратной амплификации и универсального праймера.

RT-PCR — это метод, при котором молекулы РНК преобразуются в комплементарные последовательности ДНК с помощью обратной транскриптазы, после чего происходит амплификация вновь синтезированной ДНК с использованием стандартных процедур ПЦР. Обратная транскрипция ПЦР (RT-PCR) основывается на мРНК как исходном шаблоне, а не на ДНК. Этот метод обычно применяется для диагностики генетических заболеваний и для анализа экспрессии генов в различных клеточных типах.

Основная идея метода заключается в применении праймеров с разной концентрацией. Исследование проходит с отжигом на высоких температурах, что обеспечивает эффективность реакции на всех этапах лабораторного анализа.

(второе название метода:

анализ в режиме реального времени)

Технология ПЦР в реальном времени базируется на выявлении и количественном анализе продукции полимеразной реакции (патогена). Этот подход включает применение ДНК-зондов или флуоресцентных праймеров.

Данный метод способствует увеличению специфичности процессов ПЦР. В ходе анализа программа ПЦР использует циклические изменения температуры, при этом температура отжига постепенно снижается. Изначально температура превышает 75 градусов, после чего её постепенно понижают до расчётной температуры отжига праймеров или немного ниже. Затем продолжение амплификации осуществляется при уже установленной, оптимальной температуре.

Данный метод включает в себя применение нескольких пар праймеров. Основная задача мультиплексной ПЦР заключается в одновременной амплификации нескольких сегментов целевой ДНК, что позволяет сохранить исходную матричную ДНК, сократить временные затраты и снизить расходы на тестирование. Этот подход часто применяется в генетическом скрининге, когда требуется амплифицировать несколько продуктов в рамках одной реакции.

Real — time PCR

Real — time PCR (qRT-PCR) или количественная полимеразная реакция.

Данный метод является современным подходом к исследованию, целью которого является определение количества ДНК конкретного микроорганизма.

В процессе исследования осуществляется измерение уровня уже амплифицированной ДНК в реальном времени после завершения каждого цикла амплификации.

Основным преимуществом qRT-PCR (rt-pcr) является его эффективность по сравнению с другими полимеразными реакциями.

Метод ПЦР в реальном времени способен с высокой точностью и чувствительностью определить начальное количество копий матричной ДНК.

Кроме того, результаты qPCR можно анализировать без необходимости в гель-электрофорезе.

Это снижает время, затрачиваемое на работу сканера, и повышает общую пропускную способность.

Тестирование осуществляется в единой закрытой системе для qPCR.

Таким образом, риск загрязнения посторонней ДНК минимизирован.

Где можно сдать анализ на гепатит В «Б»

В Москве можно пройти анализ крови на наличие антигена или антител к вирусу гепатита B в инфекционной клинике H-Clinic. В зависимости от целей исследования используются методы лабораторной диагностики, такие как иммуноферментный анализ (ИФА) и ПЦР-тестирование для оценки качественных характеристик гепатита «Б» и определения вирусной нагрузки. Результаты анализов сопровождены расшифровкой показателей.

Расширенный анализ крови на вирусный гепатит В позволяет определить форму развития заболевания (острая/хроническая), в том числе при бессимптомном и скрытом течении. Все исследования можно пройти анонимно.